Rapid test to detect cytotoxic activity in vaccines against foot-and-mouth disease / Prova rápida para detectar atividade citotóxica em vacinas para febre aftosa

Substances with cytotoxic activity present in vaccines against the foot-and-mouth disease may interfere with methods used to detect residual live virus in the product or cause undesirable postvaccination reactions. This study describes a rapid in vitro test to detect cytotoxic activity in water-in-oil vaccines against foot-and-mouth disease using a commercial saponin as a cytotoxic agent and a solution of sheep's red blood cells as substrate. Hemolytic and cytotoxic activity was analyzed using experimental and commercial vaccines prepared with and without saponin. The hemolytic and cytotoxic potential of preparations containing saponin was evident. In contrast, hemolytic and cytotoxic activities were not observed in vaccines without saponin in their composition. The method described here allows to easily detect if the vaccine under study has cytotoxic activity, making it possible to select the most appropriate method to process the sample to be used for the innocuity test. Additionally, due to undesirable effects that may be observed in animals receiving vaccines containing saponin in their formulation, the use of the rapid test described here allows to identify those vaccines with cytotoxic activity and to verify the presence of saponin on them, through the mass spectrometry method.(AU)

Substâncias com atividade citotóxica presentes em vacinas contra febre aftosa podem interferir com o método utilizado para a detecção de vírus ativo residual no produto ou causar reações pós-vacinais indesejáveis. O presente trabalho descreve uma prova rápida in vitro para detectar atividade citotóxica em vacinas oleosas contra febre aftosa utilizando uma saponina comercial como agente citotóxico e uma solução de hemácias de carneiro como substrato. Analisaram-se as atividades hemolítica e citotóxica utilizando-se vacinas experimentais e comerciais preparadas com e sem saponina. O potencial hemolítico e citotóxico dos preparados que continham saponina na sua formulação foi evidente. Em contraste, não se observou atividade hemolítica e citotóxica nas vacinas sem saponina. O método descrito permite conhecer rapidamente se a vacina em estudo apresenta atividade citotóxica e, dessa maneira, selecionar o método mais adequado para processar a amostra que será utilizada para investigar a presença de vírus ativo residual. Adicionalmente, devido aos efeitos indesejáveis que podem ser observados em animais que recebem vacinas que contêm saponina na sua formulação, o uso da prova rápida descrita permite selecionar aquelas vacinas com atividade citotóxica para posteriormente verificar a presença de saponina através de técnicas analíticas como a espectrometria de massas.(AU)

Serological response against bovine herpesvirus and bovine viral diarrhea virus induced by commercial vaccines in Holstein heifers / Resposta sorológica contra herpesvírus bovino e vírus da diarreia viral bovina induzida por vacinas comerciais em novilhas Holandesas

Vaccination is a strategy to the prevention and control of reproductive diseases caused by bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), however the various compositions of commercial vaccines should be evaluated for their ability to induce protection mediated by antibodies. The objective of this research was to evaluate the production of specific neutralizing Abs against BVDV-1 and 2, and BoHV-1 induced by commercial vaccines composed by different adjuvants. Holstein heifers were vaccinated and distributed in three experimental groups: Group I (G1) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1, BVDV-2 and BoHV-1 diluted in alum hydroxide as adjuvant (n=9); Group II (G2) was vaccinated with an product containing inactivated strains of BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 and BoHV-5 diluted in oil emulsion as adjuvant (n=10); Group III (G3) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1 and BVDV-2, besides live modified thermosensitive BoHV-1, diluted in Quil A, amphigen and cholesterol (n=10); A control, non-vaccinated group (n=6) was mock vaccinated with saline. Heifers received two subcutaneous doses of 5mL of each commercial vaccine on the right side of the neck, with 21 days interval. Humoral immune response was assessed by the virus neutralization test (VN) against BVDV-1 (NADL and Singer strains), BVDV-2 (SV253 strain) and BoHV-1 (Los Angeles strain) in serum samples collected on vaccination days zero (D0), 21 (D21) and 42 (D42; 21 days after boosting). Neutralizing Abs against BVDV-1 NADL was detected only in D42, regardless of the vaccine used. Similar geometric mean titers (GMT) for BVDV-1 NADL were observed between G1 (log2=5.1) and G3 (log2=5.1). The seroconversion rate (%) was higher in G1 (78%) when compared to G2 (10%) and G3 (40%). For BVDV-1 Singer, it was also possible to detect Abs production in G1 (log2=5.8, 100% seroconversion rate) and G3 (log2=3.5, seroconversion rate = 60%), only after the booster dose (D42). Neutralizing Abs to BVDV-2 (SV253) were detected only in G3, observing 90% seroconversion associated with high titers of Abs (log2=6.7) after the 2nd dose of vaccine (D42). Heifers from G1 and G3 responded to BoHV-1 after the first dose (D21): G1 (log2=2.5, seroconversion rate = 67%) and G3 (log2=0.7, seroconversion rate = 80%). In D42, a higher magnitude response was observed in the heifers from G3 (log2=6.1, 100%) compared with G1 (log2=4.3, 100%) and G2 (log2=2.7, 60%). Based on the data obtained, it can be concluded that the commercial vaccine contained aluminum hydroxide (G1) was most effective in the induction of antibodies against BVDV-1. On the other hand, this vaccine did not induce the production of neutralizing Abs against BVDV-2. Only the heifers from G3 (Quil A, amphigen and cholesterol) generated neutralizing Abs against BVDV-2. The animals that received commercial vaccine containing oil emulsion as adjuvant (G2) had a weak/undetectable response against BVDV-1 and BVDV-2. The best protective response against BoHV-1 was observed in heifers vaccinated with the live modified thermosensitive virus.(AU)

A vacinação é utilizada como estratégia para a prevenção e controle das doenças reprodutivas, causadas pelos vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), entretanto, as diversas composições de vacinas comerciais devem ser avaliadas quanto a sua eficiência protetiva mediada por anticorpos (Acs). O objetivo desta pesquisa foi avaliar a produção Acs neutralizantes específicos para cepas de BVDV-1 e 2, e BoHV-1 induzida por vacinas comerciais contendo diferentes tipos de adjuvantes. Para tal, novilhas Holandesas foram vacinadas e distribuídas em três grupos experimentais: Grupo I (G1) foi vacinado com uma vacina comercial composta por cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2 e BoHV-1 diluídas em hidróxido de alumínio como adjuvante (n=9); Grupo II (G2) foi vacinado com produto contendo as cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 e BoHV-5 em uma emulsão oleosa como adjuvante (n=10); O Grupo III (G3) foi vacinado com uma vacina comercial contendo BVDV-1 e BVDV-2 inativado, além do BoHV-1 vivo modificado e termosensivel, diluídos em adjuvante contendo Quil A, Amphigem e colesterol (n=10); O Grupo Controle não vacinado (n=6) foi inoculado com solução salina. As novilhas receberam duas doses das respectivas vacinas ou solução salina (5mL), com intervalo de 21 dias, por via subcutânea, na tábua do pescoço do lado direito. A resposta imune humoral foi avaliada pelo teste de vírus neutralização (VN) contra o BVDV-1 (cepas NADL e Singer), BVDV-2 (cepa SV253) e BoHV-1 (cepa Los Angeles) em amostras de soro coletadas nos dias (D) de vacinação zero (D0), 21 dias após 1ª dose (D21)e 42 (D42; 21 dias após A 2ª dose). Os anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 NADL foram detectados apenas em D42, independentemente da vacina utilizada. Os títulos médios geométricos (GMT) de anticorpos foram semelhantes entre G1 (log2=5,1) e G3 (log2=5,1). A taxa de soroconversão foi maior no G1 (78%) quando comparado ao G2 (10%) e G3 (40%). Para o BVDV-1 Singer, somente após D42 foi observada a produção de Acs no G1 (log2=5,8; taxa de soroconversão de 100%) e G3 (log2=3,5; taxa de soroconversão = 60%). Os anticorpos contra BVDV-2 (SV253) foram detectados apenas nas novilhas do G3, observando-se taxa de soroconversão de 90% com altos títulos de anticorpos neutralizantes (log2=6,7) em D42. Novilhas G1 e G3 responderam ao BoHV-1 após a primeira dose (D21): G1 (log2=2,5; taxa de seroconversão = 67%) e G3 (log2=0,7; taxa de seroconversão = 80%). Em contrapartida, foi observada uma maior magnitude de resposta para as novilhas G3 (log2=6,1; 100%) em D42, em relação aos animais G1 (log2=4,3; 100%) e G2 (log2=2,7; 60%). Com base nos dados obtidos, foi possível concluir que a vacina composta por hidróxido de alumínio (G1) foi mais eficaz na produção de anticorpos contra o BVDV-1, em contrapartida esse produto não induziu anticorpos contra o BVDV-2. Apenas as novilhas do G3 (Quil A, amphigen e colesterol) geraram Acs neutralizantes contra o BVDV-2. Os animais que receberam a vacina em emulsão oleosa (G2) como adjuvante apresentaram uma resposta fraca/indetectável contra o BVDV-1 e BVDV-2. A melhor resposta protetiva contra o BoHV-1 foi observada nas novilhas vacinadas com a vacina viva modificada termosensível.(AU)

Bovine Vaccinia in dairy cattle and suspicion of vesicular disease on milkers in Brazil / Vaccinia bovina em gado leiteiro e suspeita de doença vesicular em ordenhadores no Brasil

ABSTRACT: Bovine vaccinia (BV) is a vesicular disease induced by the Vaccinia virus (VACV) that affects milk production and is an occupational zoonosis. This research had the following objectives: (i) detection of VACV by qPCR in cattle with clinical suspicion of vesicular disease; (ii) symptoms characterization in animals and milkers with clinical suspicion of the disease and virus detection in humans; and (iii) identification of risk factors for infections of VACV in herds from several Brazilian states. A total of 471 bovine epithelial samples from dairy farms, in 15 Brazilian states, were evaluated between 2007 and 2012. The samples were tested by quantitative PCR (qPCR) using SYBR Green® reagents, validated with a lower limit of detection of 100 TCID50/50µL (1.7x100 viral particles), and 45.1% of VACV positive samples were detected. Using official forms for epidemiological investigation (FORM-IN), the risk factors for VACV infections in cattle were determined to be farms with a lack of technological facilities (P=0.029) and the presence of rodents (P=0.001). There was an effect of seasonality in cattle with a higher occurrence of BV during the dry season. A total of 420 epidemiological questionnaires were applied at public health care centers, where 100% of the milkers had vesicular lesions on their hands (98.1%) and on their arms (6.9%). The most frequent clinical symptoms in humans were: local swelling (74.2%), headache (20.7%), fever (10.4%) and inguinal lymphadenopathy (74.2%). Only 19.98% of milkers aged between 39 and 58 years were seroreactive to VACV and were immunized with the human anti-smallpox vaccine. There was an increase in the frequency of BV in older individuals due to their natural decrease in specific immunity. It has been shown that the implementation of zootechnical management techniques and health planning are important for the prevention of BV in animals and humans.

RESUMO: Vaccinia bovina (VB) é uma doença vesicular induzida pelo Vaccinia virus (VACV) que afeta a produção de leite e é uma zoonose ocupacional. Este trabalho teve os seguintes objetivos: (i) detecção de VACV por qPCR em bovinos com suspeita clínica de doença vesicular; (ii) caracterização dos sintomas apresentados por animais e ordenhadores com suspeita clínica da doença e detecção do vírus em humanos; e (iii) identificação de fatores de risco para infecção por VACV em rebanhos de vários estados brasileiros. Um total de 471 amostras de epitélio bovino de fazendas leiteiras, em 15 estados brasileiros, foram avaliados entre 2007 e 2012. As amostras foram testadas por PCR quantitativa (qPCR) usando reagentes SYBR Green®, validados com um limite inferior de detecção de 100TCID50/50μL (1,7x100 partículas virais) e 45,1% das amostras positivas de VACV foram detectadas. Usando formulários oficiais de investigação epidemiológica (FORM-IN), os fatores de risco para infecções por VACV em bovinos foram determinados como fazendas com falta de instalações tecnológicas (P=0,029) e presença de roedores (P=0,001). Houve um efeito da sazonalidade no gado com maior ocorrência de VB durante a estação seca. Um total de 420 questionários epidemiológicos foram aplicados nos centros públicos de saúde, onde 100% dos ordenhadores apresentaram lesões vesiculares nas mãos (98,1%) e nos braços (6,9%). Os sintomas clínicos mais frequentes em humanos foram: inchaço local (74,2%), cefaleia (20,7%), febre (10,4%) e linfadenopatia inguinal (74,2%). Apenas 19,98% dos produtores de leite com idade entre 39 e 58 anos foram sororreagentes ao VACV e foram imunizados com a vacina contra a varíola humana. Houve um aumento na frequência de BV em indivíduos mais velhos devido à sua diminuição natural na imunidade específica. Demonstrou-se que a implementação de técnicas de gestão zootécnica e planejamento sanitário são importantes para a prevenção da VB em animais e seres humanos.

Occurrence of antibodies anti -Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Leptospira interrogans in a captive deer herd in Southern Brazil / Ocorrência de anticorpos anti -Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leptospira interrogans em um rebanho de cervídeos de cativeiro do sul do Brasil

Abstract A large number of Brazilian zoos keep many endangered species of deer, however, very few disease surveillance studies have been conducted among captive cervids. Blood samples from 32 Brazilian deer (Blastocerus dichotomus, Mazama nana and Mazama americana) kept in captivity at Bela Vista Biological Sanctuary (Foz do Iguaçu, Brazil) were investigated for 10 ruminant pathogens, with the aims of monitoring deer health status and evaluating any potential zoonotic risk. Deer serum samples were tested for Brucella abortus, Leptospira (23 serovars), Toxoplasma gondii, Neospora caninum, bovine viral diarrhea virus, infectious bovine rhinotracheitis virus, foot-and-mouth disease virus, western equine encephalitis virus, eastern equine encephalitis virus and Venezuelan equine encephalitis virus. Antibodies against T. gondii (15.6%), N. caninum (6.2%) and L. interrogans serogroup Serjoe (3.1%) were detected. The serological results for all other infectious agents were negative. The deer were considered to be clinically healthy and asymptomatic regarding any disease. Compared with studies on free-ranging deer, the prevalences of the same agents tested among the captive deer kept at the Sanctuary were lower, thus indicating good sanitary conditions and high-quality management practices at the zoo.

Resumo Um grande número de zoológicos brasileiros abriga espécies de cervídeos ameaçados de extinção, entretanto, estudos de vigilância de doenças em cervídeos de cativeiro são escassos. Amostras de sangue de 32 cervídeos brasileiros (Blastocerus dichotomus, Mazama nana e Mazama americana), mantidos em cativeiro no Refúgio Biológico Bela Vista (Foz do Iguaçu, Brasil), foram investigados para 10 patógenos de ruminantes, visando monitorar o estado de saúde dos cervídeos e avaliar a presença de agentes zoonóticos. As amostras de soro foram testadas para Brucella abortus, Leptospira (23 sorovares), Toxoplasma gondii, Neospora caninum, diarreia viral bovina, rinotraqueíte infecciosa bovina, febre aftosa, encefalomielite equina do oeste, encefalomielite equina do leste e encefalomielite equina venezuelana. Foram detectados anticorpos para T. gondii (15,6%), N. caninum (6,2%) e para L. interrogans sorogrupo Serjoe (3,1%). As sorologias apresentaram resultado negativo para as demais doenças. Os cervídeos foram considerados clinicamente sadios e assintomáticos para doenças. Comparados aos estudos de populações de vida livre, as soroprevalências para os mesmos agentes testados foram menores para os cervídeos mantidos no Refúgio, indicando as boas condições sanitárias e a qualidade das práticas de manejo no zoológico.

A experiência brasileira na erradicação da febre aftosa e o emprego do sistema I-ELISA 3ABC/EITB para certificação sanitária de bovinos e bubalinos / The Brazilian experience in the eradication of foot-and-mouth disease and the use of I-ELISA 3ABC/EITB system for sanitary certification of bovine and buffaloes

A vacinação contra febre aftosa é ferramenta eficaz para erradicação e prevenção da doença, contudo, a presença de proteínas não capsidais (PNC) na vacina, produzidas durante a multiplicação viral, tem sido o principal problema, visto que sua presença dificulta as ações de vigilância, cuja busca se baseia na detecção de anticorpos contra essas proteínas para diferenciar animal vacinado de infectado. Por esse motivo, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento publicou em 2008 a Instrução Normativa nº 50 (IN 50), que incluiu no controle da qualidade da vacina a pesquisa de anticorpos contra as PNC, para avaliar a retirada dessas proteínas. Considerando a interferência vacinal, objetivou-se avaliar a frequência de bovinos reagentes às PNC, analisada pelo sistema I-ELISA 3ABC/EITB, no Laboratório de Viroses de Bovídeos do Instituto Biológico de São Paulo, no período de 2002 a 2012. Dos 34.705 bovinos examinados, observou-se que a proporção de reagentes às PNC aumentou com a idade, evidenciando aumento da frequência de reagentes em animais que receberam maior número de vacinações, indicando interferência da vacinação na resposta às proteínas. Quando comparados antes e após a publicação da IN 50, observa-se diminuição da reatividade, com redução, em 2010, de quase a metade em relação a 2007, e ainda maior quando comparado com o período 2002 a 2006. Isso demonstra a efetividade da purificação da vacina em resposta ao cumprimento da IN 50, embora permaneça alguma sororreatividade em bovinos com múltiplas vacinações. O sistema I-ELISA 3ABC/EITB demonstrou ser uma ótima ferramenta para impedir a movimentação de possíveis portadores do vírus oriundos de rebanhos vacinados, desde que seja considerado todo o contexto sanitário e epidemiológico.(AU)

Vaccination against foot-and-mouth disease is an effective tool for eradication and prevention of this disease. However, the presence of non-capsidal proteins (NCP) in the vaccine, produced during viral replication, has been the main problem, since their presence hamper the vigilance as its relies on the detection of antibodies against NCP to differentiate vaccinated from infected animals. Therefore, the Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Supply published the Normative Instruction 50 (IN 50) that included the detection of antibodies against the NCP to evaluate the removal of these proteins. Considering the vaccine interference, this paper aimed to evaluate the frequency of reagents to NCP, analyzed by I-ELISA 3ABC/EITB system in the Laboratory of Bovine Viruses (LVB), Biological Institute (IB), São Paulo, SP, Brazil, from 2002 to 2012. Of the 34,705 cattle examined, it was observed that the proportion of reagents to NCP increased with age, indicating increased frequency of reagents in animals that received more vaccines, showing interference of proteins in response to vaccination. When compared before and after the publication of IN 50, there was decreased reactivity, with reduction in 2010, of nearly half compared to 2007, and even higher when compared with 2002 to 2006. This shows the effectiveness of the purification of the vaccine in response to the implementation of IN 50, although it remains some seroreactivity in cattle with multiple vaccinations. The I-ELISA 3ABC/EITB system proved to be a great tool to prevent the movement of possible carriers of the virus derived from vaccinated herds, provided that all sanitary and epidemiological context are taken in consideration.(AU)

Avaliação do extrato etanólico de casca de Punica granatum (romã) na diminuição da replicação viral do BoHV-1 Colorado em embriões murinos experimentalmente infectados / Evaluation of ethanol extract of Punica granatum (Pomegranate) peel decrease in viral replication of BoHV-1 in Colorado murine embryos experimentally infected

O objetivo do trabalho foi avaliar a diminuição da replicação viral (BoHV-1 Colorado) em embriões murinos após tratamento do extrato etanólico da casca de Punica granatum (EEPg). Camundongos fêmeas Swiss com idade entre 6 e 8 semanas foram superovuladas com 0,2 mL a 5 UI de hormônios (eCG e hCG), e acasaladas com machos da mesma idade. Após 18 horas, as fêmeas sofreram eutanásia em câmara de CO2 e, através de abertura no peritônio, os zigotos foram coletados e lavados com solução de pronase 0,5%.Os zigotos foram divididos em quatro grupos: G1 (controle), G2 (expostos aos vírus BoHV-1 Colorado a 108 TCID50/mL), G3 (expostos ao EEPg) e G4 (expostos aos vírus e ao EEPg). Os grupos foram mantidos a 37,5ºC em meio TCM199 (100µL) com 10% de soro fetal bovino em estufa a 5% de CO2 e 95% de umidade. Após 24 h, analisamos a taxa de clivagem (teste exato de Fisher; p<0,05), a morfologia (por microscopia óptica), a nested-PCR e a titulação dos embriões em cocultura com células MDBK após mais 72 h do tratamento (teste de Mann-Whitney; p<0,05) e microscopia eletrônica de transmissão (ME). Os embriões murinos tratados com EEPg apresentaram resultados satisfatórios: sem alterações morfológicas, taxa de clivagem semelhante ao controle e, apesar da detecção da presença do vírus pela nested-PCR e ME, houve diminuição do título viral após tratamentos com esse extrato, o que sugere interferência desse tratamento no ciclo viral do BoHV-1 Colorado sem alterar o desenvolvimento dos embriões.(AU)

The aim of this study was to evaluate the reduction of viral replication (Colorado BoHV-1) in murine embryos after the treatment of ethanol extract of Punica granatum peel (PgEE). Swiss female mice aged 6 to 8 weeks were superovulated with 0.2 mL of the 5 UI hormones (eCG and hCG) and mated with males of the same age. After 18 hours, the females were euthanized in a CO2 chamber, and through the opening in the peritoneum, zygotes were collected and washed with 0.5% pronase solution. The zygotes were divided into four groups: G1 (control), G2 (exposed to the virus Colorado BoHV -1 to 108 TCID50/mL), G3 (exposed to PgEE) and G4 (exposed to the virus and to PgEE). The groups were maintained at 37.5ºC in TCM199 (100 mL) with 10% fetal bovine serum in an incubator at 5% CO2 and 95% humidity. After 24 h, we analyzed the cleavage rate (Fisher's exact test; p<0.05), the morphology (by light microscopy), the nested-PCR and the titration of embryos in co-culture with MDBK cells after over 72 h of treatment (Mann-Whitney test; p<0.05) and transmission electron microscopy (TEM). The murine embryos treated with PgEE showed satisfactory results: no morphological changes, cleavage rate similar to controls, despite the detection of the presence of virus by nested PCR and TEM, there was a decrease of the viral titer after the treatment with this extract, which suggests interference of this treatment in the viral cycle BoHV-1 Colorado without altering the embryo development.(AU)

Neospora caninum as causative agent of bovine encephalitis in Brazil / Neospora caninum como agente causal de encefalite bovina no Brasil

For supporting the Brazilian bovine encephalitis surveillance program this study examined the differential diagnosis of Neospora caninum in central nervous system (CNS) by histological analysis (HE staining), immunohistochemistry (IHC), and nested-PCR using a set of primers from the Nc5 region of the genomic DNA and ITS1 region of the ribosomal DNA. A sample of 302 cattle presenting neurological syndrome and negative for rabies, aged 0 to 18 years, from herds in 10 Brazilian states was evaluated for N. caninum from January 2007 to April 2010. All specimens tested negative with IHC and nested-PCR using primers from the ITS1 region of ribosomal DNA, while two positive cases (0.66%) were found using primers from the Nc5 region of genomic DNA: a 20 month-old male and a 72 month-old female, both from São Paulo State. Only the male presented severe multifocal necrotizing encephalitis associated with mononuclear cell infiltration, a pathognomonic lesion caused by parasites of the family Sarcocystidae, and only this case was associated with N. caninum thus representing 0.33% positivity. Future studies should explore the association of IHC and nested-PCR with real-time PCR, a quantitative method that could be standardized for improving the detection of N. caninum in bovine CNS specimens.

Este estudo contribuiu para o programa de vigilância epidemiológica de encefalite bovina no Brasil realizando o diagnóstico diferencial de Neospora caninum no sistema nervoso central (SNC) por análise histológica (coloração HE), imunohistoquímica (IHC) e nested-PCR utilizando-se primers da região Nc5 do DNA genômico e da região ITS1 do DNA ribossomal. Um total de 302 amostras de bovinos com síndrome neurológica, negativos para raiva, na faixa etária de zero a 18 anos, provenientes de rebanhos de 10 estados brasileiros foi avaliada para N. caninum no período de janeiro/2007 a abril/2010. Todas as amostras foram negativas na IHC e na nested-PCR usando-se primers da região ITS1 do DNA ribossomal, enquanto dois casos (0,66%) foram positivos à nested PCR, usando-se primers da região Nc5 do DNA genômico: um macho de 20 meses de idade e uma fêmea de 72 meses de idade, ambos do Estado de São Paulo. Apenas o macho apresentou severa encefalite multifocal necrotizante associada com infiltrado inflamatório mononuclear, lesão patognomônica causada por parasitas da família Sarcocystidae, mostrando que apenas este caso de encefalite foi associado à infecção por N. caninum, representando 0,33% de positividade. Sugere-se em estudos futuros utilizar também a PCR em tempo real para detecção do parasito.

Systemic and local antibodies induced by an experimental inactivated vaccine against bovine herpesvirus type 1 / Anticorpos locais e sistêmicos induzidos por uma vacina experimental inativada contra o herpesvírus bovino tipo 1

An experimental inactivated vaccine against bovine herpesvirus-1 (BoHV-1) was produced aiming to evaluate the systemic and local antibody responses in 12 seronegative heifers, after vaccination and revaccination. Serum samples were submitted to virus neutralization assay and to ELISA test for detection of IgG1 and IgG2 isotypes. Nasal secretion samples were submitted to the same ELISA test for detection of IgG1 and IgG2 isotypes. The results showed that moderate to high neutralizing titres and IgG1 and IgG2 antibody responses were induced after the second vaccination in the serum and in nasal secretions up to 114 days post vaccination. IgG2 antibodies were the prevalent isotype for most of the post-vaccination period. The results indicate that BoHV-1 experimental inactivated vaccine elicited potentially protective IgG1 and IgG2 antibody levels, both in the systemic and mucosal compartments.

Uma vacina experimental inativada contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) foi produzida com o objetivo de se avaliar a resposta imune humoral local e sistêmica contra o BoHV-1, em 12 novilhas soronegativas, após a vacinação e a revacinação. Os soros foram submetidos à prova de vírus-neutralização para quantificação do título de anticorpos neutralizantes e a um ELISA para detecção de IgG1 e IgG2. Os swabs nasais também foram submetidos ao ELISA para detecção de IgG1 e IgG2 na secreção nasal. Os resultados demonstraram que títulos de anticorpos neutralizantes foram induzidos após a revacinação, em níveis moderados a altos, permanecendo em níveis significativos no soro sanguíneo e na secreção nasal até o dia 114 pós-vacinação. O IgG2 foi o isótipo predominante na maior parte do período pós-vacinação, tanto na secreção nasal, como no compartimento sistêmico. A vacina experimental inativada contra o BoHV-1 estimulou níveis de anticorpos potencialmente protetores dos isótipos IgG1 e IgG2, tanto no compartimento sistêmico, como nas mucosas.

Occurrence of seropositive sheep (Ovis aries) to bovine leukemia virus in Brazil / Ocorrência de ovinos (Ovis aries) soropositivos ao vírus da leucemia bovina no Brasil

Occurrence of seropositive sheep (Ovis aries) to Bovine Leukemia Virus (BLV) by agar-gel immunodiffusion test (AGID) using the antigen gp51 was surveyed for the period 2005-2007. Samples were collected from sheep in the Brazilian states of Rio Grande do Sul, Paraná, São Paulo, Pernambuco, Maranhão, Pará, Bahia, Mato Grosso, Rondônia, and Acre. Two of 35 (5.7%) flocks were seropositive to BLV, and the rate of seropositive animals was 0.077% (two of 2,592). The two seropositive sheep were female, one 13-month old Santa Inês breed and other of unknown age and breed, both from the state of São Paulo. Distribution of BLV in the ovine population studied proved to be a rare event in Brazil.

A ocorrência de ovinos sororreagentes ao vírus da Leucemia Bovina (VLB) pelo teste de imunodifusão em gel de ágar (IDGA) utilizando o antígeno gp51 foi avaliada no período de 2005-2007, em diferentes regiões do Brasil. Amostras foram colhidas de ovinos dos Estados do Rio Grande do Sul, Paraná, São Paulo, Pernambuco, Maranhão, Pará, Bahia, Mato Grosso, Rondônia e Acre. Duas em 35 cabanhas (5,7%) e dois em 2592 ovinos (0,077%) foram soropositivos. Os únicos animais com anticorpos contra o VLB eram fêmeas, uma com 13 meses de idade e da raça Santa Inês e a outra não se conhecia a idade e raça, ambas provenientes do Estado de São Paulo. A distribuição da soropositividade na população estudada demonstrou ser rara a infecção pelo VLB em ovinos no Brasil.

Diagnosis of Neospora caninum in bovine fetuses by histology, immunohistochemistry, and nested-PCR / Pesquisa de Neospora caninum em fetos bovinos por histologia, imunoistoquímica e nested-PCR

Neospora caninum, a cause of abortion and stillbirth in cattle, was studied by histology, immunohistochemistry, and nested-PCR, using primers from the Nc5 region of the genomic DNA (PCR PLUS) and primers from the ITS1 region of the ribosomal DNA (PCR JB). A total of 105 fetal samples sent to the Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal do Instituto Biológico from January 2006 to May 2008 were examined for evidence of N. caninum. Histological examination revealed 71.4 percent with non-suppurative inflammation in the heart, lung, liver, kidney, placenta, and brain. Immunohistochemistry detected infections in 8.6 percent of the samples, mainly in the brain, placenta, and heart. Nested-PCR JB revealed 6.7 percent with infections, while nested-PCR PLUS returned 20.9 percent positive results, mainly in brain and placenta, and in the pooled liver and heart. Kappa statistics demonstrated little agreement among the three techniques. The three methods are complementary, since they have distinct diagnostic characteristics and were combined to give a positivity rate of 24.8 percent.

Pesquisou-se Neospora caninum como causador de abortamento e natimortalidade em bovinos, por meio de exame histopatológico (hematoxilina-eosina), imunoistoquímica (IHQ) e nested-PCR, utilizando primers da região Nc5 do DNA genômico (PCR PLUS) e primers da região ITS1 do DNA ribossomal (PCR JB). Foram avaliadas 105 amostras de abortamento bovino entre janeiro de 2006 a maio de 2008, encaminhadas ao Centro de Pesquisa e Desenvolvimento de Sanidade Animal do Instituto Biológico para diagnóstico diferencial de causas infecciosas. Observou-se em 71,4 por cento das amostras lesões histológicas (HE) caracterizadas pela presença de células inflamatórias mononucleares no coração, pulmão, fígado, rim, placenta e cérebro. A IHQ detectou 8,57 por cento de positividade, sendo maior no cérebro, placenta e coração. A nested-PCR JB revelou 6,66 por cento de casos positivos, enquanto que a nested-PCR PLUS apresentou maior taxa de positividade (20,95 por cento), principalmente no cérebro, placenta e no pool fígado/coração. Houve baixo grau de concordância entre as três técnicas pelo índice kappa. A taxa de positividade para qualquer uma das técnicas (IHQ, nested-PCR PLUS e nested-PCR JB) foi de 24,8 por cento, devendo ser consideradas conjuntamente pelo fato de possuírem características distintas e serem, portanto, complementares no diagnóstico definitivo da neosporose.

Reproductive rates and performance traits in beef cattle infected by Bovine Herpesvirus

Reproductive rates and performance traits in beef cattle females infected by Herpesvirus Bovine-1 (BoHV-1) were evaluated in a farm at São Paulo state, Brazil. Gir, Guzerá, Nelore and Caracu purebred animals were examinated to BoHV-1 (ELISA) at the beginning of the breeding season and the occurrence of reactors was 54.2% (386/712). BoHV-1 did not interfere in the pregnancy rates of both reagent – 80.3% (310/386) and non-reagent - 74.5% (243/326) females. It did not reduce the parturition rate of both reagent - 97.7% (300/307) and non-reagent - 93.8% (225/240) females. Total rate of stillbirths in BoHV-1 reagent females - 1.3% (4/300) did not differ from non-reagent females - 2.2% (5/225). BoHV-1 did not affect performance traits for reagent and non-reagent females, respectivelly, to daily weight gain during the breeding season (459.90 ± 2.82g and 466.63 ± 2.87g), body condition score at the beginning of the breeding season (6.89 ± 0.08 and 6.99 ± 0.08), body condition score at the end of the breeding season (7.73 ± 0.06 and 7.71 ± 0.06), weight at parturition (419.17 ± 3.34kg and 425.97 ± 3.22kg). It was concluded that non-vaccinated beef cattle females infected by BoHV-1 and bred under adequate extensive management, with body condition scare over 5 and gain of weight during the breeding season presented good pregnancy, parturition and birth rates, no matter the breed, genetic group, age and seroconvertion.

Avaliou-se índices reprodutivos e características de desempenho em fêmeas bovinas de corte, infectadas pelo Herpesvírus Bovino-l (BoHV-1), em um rebanho no Estado de São Paulo, Brasil. Animais das raças Gir, Guzerá, Nelore e Caracu foram monitorados no início da estação de monta e a sororeatividade ao BoHV-1 pelo teste ELISA foi 54,2% (386/712). O BoHV-1 não interferiu no índice de prenhez de matrizes reagentes - 80,3% (310/386) e não reagentes - 74,5% (243/326) e nem reduziu a taxa de parição de matrizes reagentes - 97,7% (300/307) e não reagentes - 93,8% (225/240). O coeficiente de natimortalidade de matrizes reagentes ao BoHV-1 - 1,3% (4/300) não diferiu da encontrada para as não reagentes - 2,2% (5/225). O BoHV-1 não afetou a média de algumas características de desempenho de fêmeas reagentes e não reagentes, respectivamente, como ganho de peso médio diário durante a estação de monta (459,90 ± 2,82g e 466,63 ± 2,87g), condição corporal na entrada da estação de monta (6,89 ± 0,08 e 6,99 ± 0,08), condição corporal na saída da estação de monta (7,73 ± 0,06 e 7,71 ± 0,06) e peso à parição (419,17 ± 3,34kg e 425,97 ± 3,22kg). Concluiu-se que matrizes de corte infectadas pelo BoHV-1 e não vacinadas, criadas sob condições adequadas de manejo zootécnico extensivo e nutricional, como escore corporal acima de 5 e ganho de peso durante a estação de monta, apresentaram bons índices de prenhez, parição e natalidade, independente da raça, grupo genético, faixa etária e soroconversão.

Pesquisa de anticorpos contra o vírus da Estomatite Vesicular em bovinos de corte criados na região de Araçatuba, Estado de São Paulo, Brasil em 2000 / Vesicular Stomatitis: Serological Survey in beef cattle from region of Araçatuba, São Paulo State, Brazil in 2000

No ano de 2000 foram pesquisadas 1099 amostras de soro de bovinos de corte, adultos, pertencentes à seis rebanhos situados nos municípios de Auriflama, Gastão Vidigal,, Magda, Santo Antônio do Aracanguá, Sebastianópolis do Sul e Turiúba, região de Araçatuba. A técnica empregada para a dosagem de anticorpos para o vírus da Estomatite Vesicular foi a soroneutralização em microplacas, utilizando a cepa Indiana 1 Costa Rica/72 com título de 10(6,0) DICT50/50mL. As células utilizadas foram as da linhagem de Rim de Macaco Verde Africano (VERO-CCL 81), provenientes do American Type Cell Colection (ATCC). O título de anticorpos de cada amostra de soro, foi calculado como a recíproca da maior diluição do soro expresso em log10, que protegeu 100,00 por cento da monocamada celular. Foram consideradas positivas as amostras com título superior a 1,6 log10 (1/40). Das 1099 amostras de soro analisadas, 28 (2,50 por cento) foram positivas ao vírus da Estomatite Vesicular tipo Indiana 1, com títulos de anticorpos variando de 1,9 à 2,8. Com exceção do rebanho situado no município de Turiúba, nos outros cinco foram encontrados animais reagentes ao vírus. Esta avaliação mostrou que houve circulação do vírus da Estomatite Vesicular nestes rebanhos provocando resposta humoral. Sendo assim é necessário a realização de estudos para se determinar o sítio de permanência do vírus.

Erradicação do herpesvírus bovino - 1 (BHV-1) de um rebanho bovino leiteiro em manejo semi-intensivo / Eradication of Herpesvirus Bovine-1 (BHV-1) from a dairy cattle herd with a semi-intensive management

Com o objetivo de erradicar o BHV-1 de um rebanho bovino leiteiro de alto valor genético sem a utilização de vacina, foi realizado um exame sorológico prévio em 154 animais, onde constatou-se 15,6% de reagentes ao BHV-1. A técnica utilizada foi a soroneutralização em microplacas. Dentre os animais soropositivos, as vacas vazias foram descartadas imediatamente e as prenhes isoladas e descartadas após o parto. Os bezerros apresentaram anticorpos colostrais até os seis meses de idade, motivo pelo qual não foram descartados; nos bezerros de 6 a 12 meses de idade e nas novilhas não foram diagnosticados animais soropositivos. Os animais foram examinados trimestralmente, por 21 meses, seguido de mais duas coletas semestrais. As vacas secas, prenhes e em lactação, soropositivas, revelaram ser a fonte de infecção do BHV-1. A manutenção de rebanho livre é possível, desde que sejam adotadas medidas como a utilização de sêmen livre de BHV-1, realização de quarentena no ingresso de animais e exames sorológicos anuais visando impedir a reintrodução do vírus. Com o conjunto destas medidas adotadas, a fazenda encontra-se há 18 meses livre do BHV-1